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鸡25 羟维生素D (25 (OH )VD ) 酶联免疫

阅读次数:82 发布时间:2019/8/1 13:53:31

 鸡25 羟维生素D (25 (OH )VD ) 酶联免疫鸡25 羟维生素D (25 (OH )VD ) 酶联免疫 分析
试剂 盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围 : 96T
0.3ng/ml - 12ng/ml
使用目的 :
本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中 25 羟维生素 D(25(OH)VD)含
量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡 25 羟维生素 D(25(OH)VD)水平。用纯
化的鸡 25(OH)VD 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 25(OH)
VD,再与 HRP 标记的 25(OH)VD 抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底
洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最
终的黄色。颜色的深浅和样品中的 25(OH)VD 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定
吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样品中鸡 25 羟维生素 D(25(OH)VD)浓度。
试剂盒组成
1  30 倍浓缩洗涤液  20ml×1 瓶  7  终止液  6ml×1 瓶
2  酶标试剂  6ml×1 瓶  8  标准品(24ng/ml)  0.5ml×1 瓶
3  酶标包被板  12 孔×8 条  9  标准品稀释液  1.5ml×1 瓶
4  样品稀释液  6ml×1 瓶  10  说明书  1 份
5  显色剂 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 张
6  显色剂 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 个
标本 要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融
2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1.  标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
12ng/ml  5 号标准品  150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
6.0ng/ml  4 号标准品  150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
3.0ng/ml  3 号标准品  150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
1.5ng/ml  2 号标准品  150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
0.75ng/ml  1 号标准品  150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.  加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,
然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽
量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.  温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4.  配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5.  洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7.  温育:操作同 3。
8.  洗涤:操作同 5。
9.  显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止
液后 15 分钟以内进行。
操作程序总结 :
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标
准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,
即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间
控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值
大于标准品孔孔的 OD 值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
保存条件及有效期
1.试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月
 

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